Manuel kan yayması incelemesi, tam hematolojik değerlendirmenin önemli bir bileşenidir ve her zaman otomatik hematolojik analizle birlikte yapılmalıdır. En doğru mikroskobik değerlendirmeye olanak tanımak için kan yaymaları, yüksek kaliteli periferik kan yayması preparatlarını sağlamaya yardımcı olan tutarlı tekniklerle hazırlanmalıdır.
Temiz, yüksek kaliteli cam mikroskop lamları kan yayması hazırlığı için esastır. Cam lamlar, kanın yayılmasını etkileyebileceği için kırık kenar, cam parçacığı, toz, pudra, parmak izi ve diğer debrislerden arınmış olmalıdır. Buzlu uçlu lamlar (Şekil 1) tarih ve hasta kimlik bilgisiyle etiketlenebilir; bunlar kalem veya suya ve solvente dirençli laboratuvar markörüyle yazılmalıdır. Geleneksel tükenmez kalem ve markörlerden kaçınılmalıdır; çünkü mürekkep boyama sırasında tipik olarak silinir. Örnek lamı ve yayıcı lam olarak iki temiz cam lam kullanılmalıdır. Lamlar buzlu uçtan tutulmalıdır; yayıcı lamın kısa, buzlu olmayan ucuna dokunmaktan kaçınılmalıdır.
Şekil 1. Buzlu uçlu, kırık kenar, cam parçacığı, toz, pudra, parmak izi ve diğer debrislerden arınmış iki temiz, yüksek kaliteli cam mikroskop lamı.
Şekil 1. Buzlu uçlu, kırık kenar, cam parçacığı, toz, pudra, parmak izi ve diğer debrislerden arınmış iki temiz, yüksek kaliteli cam mikroskop lamı.
Kan yaymaları iyi karıştırılmış EDTA-antikoagüle kan kullanılarak hazırlanmalıdır. Örnek, lam hazırlığından önce tüp birkaç kez nazikçe ters çevrilerek karıştırılabilir. Yayma için uygun örnek hacmini sağlamak amacıyla (bkz. Adım 2) örneğin bir damlasını cam lama yerleştirmek için pipet yerine mikrohematokrit kapiller tüp kullanılması önerilir.
İstenen kan yayması kalitesine ulaşmak için üç faktör değiştirilebilir: kan damlasının boyutu, yayıcı lamın açısı ve yayma hızı. Damla çok küçükse yayma yeterli tanısal değerlendirme için yeterince uzun olmayabilir; damla çok büyükse yayma lam kenarının ötesine uzanabilir; bu da hücre kümelerinin kaybına yol açabilir ve mikroskobik değerlendirme için gereken feathered edge oluşumunu engelleyebilir. 1 Yayıcı lam için 30°’den büyük açı daha kalın ve kısa preparat, daha küçük açı ise daha ince ve uzun yayma verir. Yayıcı lamın hızı da yayma uzunluğu ve kalınlığını etkileyebilir. Hızlı yayma daha kısa veya ince, yavaş yayma daha uzun veya kalın preparatla sonuçlanabilir. 1,2
Kan viskozitesi de lam hazırlığını etkiler. Örneğin hematokriti artmış bir hastanın artmış kan viskozitesi çok kalın bir preparata yol açabilir. Bu olgularda yayıcı lam açısını azaltmak, mikroskobik değerlendirme için daha uygun daha ince bir preparat elde etmeye yardımcı olabilir. Benzer şekilde anemik hastada azalmış kan viskozitesi ince preparata yol açar. Bu olgularda yayıcı lam açısını artırmak daha kalın preparat verir. 1,3
Ekipman ve Malzemeler
Buzlu uçlu temiz, yüksek kaliteli cam mikroskop lamları
Kalem veya laboratuvar markörü
EDTA-antikoagüle kan
Mikrohematokrit kapiller tüpler
Kan yayması hazırlığı için gereken ekipman.
Adım 1
Örneğin yeterli karışmasını sağlamak için örneği birkaç kez nazikçe ters çevirin (A ve B). Stoperu çıkarın ve bir kapiller tüpü yaklaşık dörtte üçü kanla doldurun (C). Örneğin boşalmasını önlemek için kapiller tüpün bir ucuna parmak koyun (D).
Şekil. Adım 1A: Karıştırmak için EDTA tüpünü ters çevirin.Şekil. Adım 1B: Nazik ters çevirmeye devam edin.Şekil. Adım 1C: Kapiller tüpü ≈¾ kanla doldurun.Şekil. Adım 1D: Boşalmayı önlemek için kapiller uca parmak koyun.
Adım 2
Örnek lamının orta hattına, buzlu uçtan yaklaşık 0,5 cm uzağa bir damla kan koyun. Kapiller tüpü lam üzerinde tutun ve kan damlası yaklaşık 4 mm çapa ulaşana kadar kanın örnek lama damlaması için parmak basıncını kaldırın. 2
Şekil. Adım 2: Buzlu uca yakın ≈4 mm kan damlası yerleştirin.
Adım 3
Yayma, kan damlası lama konur konmaz yapılmalıdır. Dominant olmayan elle örnek lamını tezgâhta yerinde tutmak için buzlu uca nazikçe basın. Dominant elle yayıcı lamın kenarlarını, bir uzun kenara 2 veya 3 parmak ve karşı kenara başparmak koyarak kavrayın. Yayıcı lamın kısa kenarını 30°–40° açıyla kan damlasının hemen önüne yerleştirin (A). Yayıcı lamın kenarını kan damlasıyla buluşup kanın yayıcı lam kenarı boyunca yayılmasına kadar geri çekin (B), ardından yayıcı lam kenarının örnek lamıyla temasını koruyarak kanı hızlı ve akıcı biçimde örnek lamının ucuna doğru ilerletin (C). Kan filmi lam uzunluğunun yaklaşık dörtte üçüne uzanmalı ve düz veya mermi şeklinde feathered edge ile sonlanmalıdır. Yayma ışığı yansıtırken gökkuşağı parıltısı göstermeli; sırt, çizgi veya delik olmamalıdır.
Yayma lamın ucuna çok yakın uzanırsa, bazı otomatik boyayıcılarda feathered edge kısmı boyanmadan kalabilir. Örnek değerlendirme için referans laboratuvara gönderiliyorsa bu sorun olabilir; ancak Romanowsky boyaması ve klinik içi değerlendirme için sorun teşkil etmemelidir.
Şekil. Adım 3A: Damlanın önünde 30°–40° yayıcı lam.Şekil. Adım 3B: Kan kenar boyunca yayılana kadar geri çekin.Şekil. Adım 3C: Feathered edge oluşturmak için ileri itin.
Adım 4
Hava ile kurumayı kolaylaştırmak için lamı ileri–geri sallayın veya ılık ayardaki saç kurutma makinesi ya da ısı tabancasının önünde birkaç saniye tutun. Yüksek ısı ayarı kullanmayın veya lamı ısı kaynağına yakın tutmayın; çünkü bu hücrelere zarar verebilir. 1
Adım 5
Lamı grafit kalem veya laboratuvar markörüyle etiketleyin (A). Etiket hasta adı ve/veya kimlik numarası ile tarihi ve gerekli ek bilgileri içermelidir. Lam ardından mikroskobik değerlendirme için boyanmaya hazırdır. Örnek değerlendirme için referans laboratuvara gönderilecekse örnekle birlikte ideal olarak en az bir boyanmamış kan yayması da bulunmalıdır (B).
Şekil. Adım 5A: Lamı kalem/markörle etiketleyin.Şekil. Adım 5B: Gerekirse gönderim için boyanmamış yayma.
